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一种经济简便的pcr产物凝胶乙醇纯化方法

  • 专利名称

    一种经济简便的pcr产物凝胶乙醇纯化方法

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  • 文档编号

  • 技术领域

    本发明涉及一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,属于生物

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  • 发明内容

    本发明的目的是克服上述弊端,而提供一种成本较低、高效、快速、回收片段范围大的PCR产物的纯化方法本发明解决问题所采取的技术方案是一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,其特征是将经琼脂糖凝胶电泳DNA分离技术分离得到的PCR产物中的目的DNA片段切胶后放入离心管,向其直接加去离子水并水浴锅加热使凝胶溶解,然后迅速加入无水乙醇,再高速离心沉淀分离得到纯化产物所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,其中加热为水浴锅加热至煮沸,煮沸时间约610分钟所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,其中无水乙醇是在凝胶刚溶解完时立即加入的所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,其中先加入的去离子水与后加入的无水乙醇的体积比为410所述的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,其中离心沉淀用的离心速度为14000~16000转/分钟本发明提供的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,成本较低,只需几分人民币,而一般商用试剂盒成本是其数百倍,另外该方法具有高效、快速、回收片段范围大、方便等优点全套操作只需15分钟便可完成,片段范围为大于等于30bp,回收纯化的DNA片段纯度高,完整性好,纯化的产物可用于连接、标记、测序、杂交、酶切、显微注射、体外转录等后继实验本发明提供的一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法纯化效果如表1、表2和表3表1PCR产物纯化前后DNA浓度测定<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>表2PCR产物不同片段回收率比较<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>表3PCR产物不同纯化方法比较<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>具体实施例方式通过以下具体实施步骤,来进一步说明本发明(1)使用lXTAE缓冲液制作2X(w/v)的琼脂糖凝胶,然后对含有目的DNA的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳;(2)在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶,此时应注意尽量切除不含目的DNA的凝胶,尽量减少凝胶体积,切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下,以防止DNA损伤;(3)将切下的凝胶小块(约3mmX3mmX3函^9mm3)置入1.5m1离心管内,然后加入400u1去离子水;(4)将含有凝胶的离心管放入水浴锅加热至煮沸,煮沸约610分钟,使凝胶融化后迅速加入1000ul无水乙醇;(5)用漩涡振荡器将离心管震荡10秒,然后轻微离心3秒钟(短暂甩一下),此时管底会出现凝胶沉淀物;(6)将上清液倒入另一个1.5ml离心管,丢弃含有凝胶沉淀物的离心管;(7)将含有上清液的离心管离心(15000转/分钟)离心15分钟,迅速倒置弃上清液;(8)离心管盖打开,室温晾干5分钟,然后加入20u1去离子水溶解沉淀在管子底部的DNA;(9)取5nl样品,D6(w/v)琼脂糖凝胶电泳检测纯化结果,测定DNA浓度权利要求1、一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,其特征是将经琼脂糖凝胶电泳DNA分离技术分离得到的PCR产物中的目的DNA片段切胶后放入离心管,向其直接加去离子水并水浴锅加热使凝胶溶解,然后迅速加入无水乙醇,再高速离心沉淀分离得到纯化产物2、按照权利要求1所述的纯化方法,其特征是其中加热为水浴锅加热至煮沸,煮沸时间约610分钟3、按照权利要求1所述的纯化方法,其特征是其中无水乙醇是在凝胶刚溶解完时立即加入的4、按照权利要求1所述的纯化方法,其特征是其中先加入的去离子水与后加入的无水乙醇的体积比为4105、按照权利要求1所述的纯化方法,其特征是其中离心沉淀用的离心速度为1400016000转/分钟全文摘要本发明公开了一种经济简便的PCR产物凝胶乙醇纯化方法,属生物

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专利名称::一种经济简便的pcr产物凝胶乙醇纯化方法技术领域:。:PCR产物中除了含有目的DNA片段之外,还含有剩余的引物、TaqDNA酶以及dNTP,这些成分的存在将会影响到后续的一些实验。例如双脱氧PCR测序反应只需要单侧引物,因此要去除过量剩余的双侧引物;单核甘酸延伸SNP基因分型技术(AppliedBiosystemSNaPShot)要去除所有残存的dNTP,反应中只允许荧光标记的单个ddNTP掺入。因此,对PCR产物进行纯化非常必要。目前,扩增后的PCR产物纯化主要有两类一种是直接从PCR扩增反应混合物中进行纯化,如超滤、沉淀(PEG沉淀),硅结合等;另一种是先将PCR产物进行凝胶电泳,然后通过柱纯化、磁珠纯化或尼龙膜等方法纯化。然而,这些纯化方法各有利弊,一般来讲,其弊端如下1.DNA回收率不高,大致在50%90%;2.纯化试剂价格昂贵,一般的试剂盒纯化一个样本约需要人民币3-5元;3.回收DNA片段长度范围窄,尤其对短的DNA片段不易回收,且得率低;4.操作步骤比较繁琐,费时费力;5.回收使用的试剂会给后续实验带来干扰。因此,探索一种能将各种长度的PCR产物中的目的片段,大批量地、廉价地、高纯度地,纯化出来的方法,一直是分子生物学研究工作者所不断追求的。
技术领域:,它是将经琼脂糖凝胶电泳DNA分离技术分离得到的PCR产物中的目的DNA片段切胶后放入离心管,向其直接加去离子水并水浴锅加热使凝胶溶解,然后迅速加入无水乙醇,再高速离心沉淀分离得到纯化产物。该方法成本较低,具有高效、快速、回收片段范围大、方便等优点。文档编号C12N15/10GK101503684SQ20091001968公开日2009年8月12日申请日期2009年3月16日优先权日2009年3月16日发明者阳刘,刘文敏,杨树林,刚陈申请人:刚陈

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